微量精準(zhǔn)助力長沙市第一醫(yī)院研究團(tuán)隊(duì)
發(fā)現(xiàn)低病毒載量患者在HIV-1 DNA水平上
存在優(yōu)勢(shì)耐藥突變位點(diǎn)
中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬長沙醫(yī)院（長沙市第一醫(yī)院）感染病中心王敏教授團(tuán)隊(duì)，聯(lián)合暨南大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院王通教授團(tuán)隊(duì)，在HIV-1耐藥相關(guān)研究領(lǐng)域取得了重要成果——HIV-1低病毒載量患者外周血HIV-1前病毒DNA中存在優(yōu)勢(shì)耐藥位點(diǎn)（drug resistance mutations, DRMs），這提示HIV-1 DNA基因型耐藥檢測(cè)可為艾滋病治療方案的制訂和調(diào)整起到重要的參考作用。
東莞微量精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室為該研究提供了關(guān)鍵創(chuàng)新檢測(cè)技術(shù)HIV-1 DNA基因型耐藥檢測(cè)。
1、HIV-1 DNA基因型耐藥檢測(cè)介紹
臨床上用于判斷抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法（antiretroviral therapy, ART）治療效果的重要方法是檢測(cè)血漿病毒載量（viral load, VL）。研究[1]表明4%-10%的HIV-1感染者，在接受 ART 治療后，仍維持低病毒載量（low viral load，LVL）。這類HIV-1感染者出現(xiàn)病毒學(xué)失敗，產(chǎn)生耐藥性的風(fēng)險(xiǎn)更高。
基于Sanger測(cè)序的傳統(tǒng)HIV-1 RNA基因耐藥檢測(cè)方法面對(duì)VL<1000 copies/mL的HIV-1感染者時(shí)，病毒基因的擴(kuò)增失敗率較高；加拿大艾滋病診療指南提出對(duì)HIV-1 RNA<1000 copies/mL的患者，可以進(jìn)行HIV-1前病毒DNA基因型耐藥檢測(cè)。
HIV-1前病毒DNA在患者個(gè)體水平存在高度的變異性，Sanger測(cè)序的原理是對(duì)所有序列中豐度占比最高的優(yōu)勢(shì)DNA序列（dominant sequence）進(jìn)行優(yōu)先測(cè)序，這些優(yōu)勢(shì)序列的占比理論上要超過總序列數(shù)的40%。HIV-1 DNA水平的DRMs信息代表HIV-1感染者外周血HIV-1儲(chǔ)存庫中的優(yōu)勢(shì)DRMs。
2、研究介紹
研究團(tuán)隊(duì)共檢測(cè)5795例抗病毒治療半年以上的HIV-1感染者的VL，以連續(xù)兩次檢測(cè)VL均在50-1000 copies/ml范圍作為入組標(biāo)準(zhǔn)之一，共納入26例研究對(duì)象。對(duì)26例HIV-1感染者進(jìn)行HIV-1 DNA定量檢測(cè)與HIV-1 DNA基因型耐藥檢測(cè)，以巢式RCR擴(kuò)增HIV-1 pol區(qū)基因并進(jìn)行Sanger測(cè)序，使用斯坦福大學(xué)HIV耐藥數(shù)據(jù)庫等工具對(duì)序列信息進(jìn)行分析。
共發(fā)現(xiàn)7例HIV-1前病毒DNA攜帶優(yōu)勢(shì)DRMs：
4例攜非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑（NNRTIs）優(yōu)勢(shì)DRMs
1例攜核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑（NRTIs）優(yōu)勢(shì)DRMs
1例攜蛋白酶抑制劑（PIs）優(yōu)勢(shì)DRMs
1例攜整合酶抑制劑（INSTIs）優(yōu)勢(shì)DRMs
共3例呈現(xiàn)低度及以上耐藥，其中1例對(duì)于目前使用的抗病毒治療方案中的藥物產(chǎn)生低度耐藥，其余均為潛在耐藥。
3、東莞微量精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室為研究團(tuán)隊(duì)提供助力
在該研究中，東莞微量精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室提供了創(chuàng)新檢測(cè)技術(shù)HIV-1 DNA基因型耐藥檢測(cè)，解決了低病毒載量患者耐藥檢測(cè)成功率低的技術(shù)瓶頸問題，證實(shí)了低病毒載量患者存在HIV-1 DNA水平的耐藥突變。
為了進(jìn)一步滿足低病毒載量患者進(jìn)行耐藥檢測(cè)的需求，東莞微量精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室研究與開發(fā)了HIV-1 基因型耐藥檢測(cè)全面解決方案，該解決方案包含：
（1）通過優(yōu)化方法提高擴(kuò)增效率，提供高敏的HIV-1 RNA基因型耐藥檢測(cè)；
（2）應(yīng)用細(xì)胞外顆粒富集技術(shù)，通過有效富集病毒，進(jìn)一步提高HIV-1 RNA基因型耐藥檢測(cè)成功率；
（3）若高敏HIV-1 RNA基因型耐藥檢測(cè)失敗，則補(bǔ)充進(jìn)行高敏HIV-1 DNA基因型耐藥檢測(cè)。
HIV-1基因型耐藥檢測(cè)全面解決方案通過技術(shù)的升級(jí)優(yōu)化以及創(chuàng)新檢測(cè)技術(shù)的引入，全面且有效地提高了低載量樣本進(jìn)行基因型耐藥檢測(cè)的成功率，解決了臨床中HIV-1 RNA載量低于1000 copies/mL進(jìn)行基因型耐藥檢測(cè)成功率低的技術(shù)瓶頸問題。
l 文獻(xiàn)引用
文內(nèi)引用：[1] CASTILLO-MANCILLA J R, MORROW M, COYLE R P, et al. Low-Level Viremia Is Associated With Cumulative Adherence to Antiretroviral Therapy in Persons With HIV[J]. Open Forum Infectious Diseases, 2021, 8(9): ofab463. .
文獻(xiàn)來源：余維維,陳鐘,彭爽等.HIV-1低病毒載量患者外周血前病毒DNA優(yōu)勢(shì)耐藥位點(diǎn)分析[J].中國感染控制雜志,2022,21（04）:323-329.
文獻(xiàn)鏈接：http://html.rhhz.net/ZGGRKZZZ/2022-4-323.htm
關(guān)于實(shí)驗(yàn)室
東莞微量精準(zhǔn)檢測(cè)研究院有限公司創(chuàng)建于2018年5月，公司下設(shè)東莞微量精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室，是廣州海力特生物科技有限公司和暨南大學(xué)共同孵化，專注重大傳染病方向的具有第三方醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)資質(zhì)的微量精準(zhǔn)檢測(cè)技術(shù)研究機(jī)構(gòu)。
實(shí)驗(yàn)室專注于重大傳染病病原體精準(zhǔn)檢測(cè)，以及癌癥的極早期篩查和預(yù)警問題，為醫(yī)院、疾控、高校、社康等臨床或研究機(jī)構(gòu)提供創(chuàng)新領(lǐng)先的微量精準(zhǔn)檢測(cè)服務(wù)。在未來，東莞微量精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室將不斷創(chuàng)新及提升各領(lǐng)域重大傳染病的超微量精準(zhǔn)檢測(cè)技術(shù)服務(wù)。
